Validación de una metodología para la determinación de poliaminas en orina por cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC)

Validation of a methodology for determination of polyamines in urine by High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Resumen

Los niveles de poliaminas (PAs) en orina constituyen un importante biomarcador de fenómenos fisiológicos, y patológicos para el ser humano. Dada su importancia, se eligió como objetivo del presente trabajo la validación del método de PAs (Putrescina (Pu), Cadaverina (Cdv), Espermidina (Spd), Espermina (Spm), Epinefrina (Epf) e Histamina (Hst) en orina por Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución en fase reversa (RP- HPLC) con derivatización pre- columna con cloruro de dansilo y detección UV a 254 nm. Para ello se determinaron la selectividad; rango de trabajo y linealidad; límite de detección/límite de cuantificación; precisión (repetibilidad y precisión en condiciones intermedias); exactitud (medida como recuperación) y robustez. Se partió del método reportado en la Norma chilena para la detección de histamina y otras aminas biógenas en pescado y mariscos ME-711.O4-070, 2014, por lo que fue necesario implementar ajustes para su aplicación en orina. Los resultados demostraron que los aminoácidos (AAs) no causaban interferencias en el análisis de PAs, y permiten determinar concentraciones en el rango lineal entre 4 y 28 μg/mL. No obstante, no se obtuvo buena recuperación (exactitud) en el experimento, posiblemente debido a que los estándares utilizados no eran acetilados (42.6143% de Pu y 69% de Cdv). La metodología permite determinar los niveles de Pu, Cdv, Spd, Spm Hst y Efd en muestras de orina de humanos y otras especies de mamíferos.